欧盟法律规定，氟虫腈不得用于人类食品产业链的畜禽养殖过程，食品中的氟虫腈残留不能超过每千克中0.005毫克。本月炒的沸沸扬扬的欧洲“毒鸡蛋”事件就是受到了杀虫剂“氟虫腈”的污染。“毒鸡蛋”大闹七国 欧洲食品就安全？ 轻信你就错了
如何检测食品中的“氟虫腈”残留呢？
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摘要
本文建立一种在线净化⁃液相色谱串联质谱检测蔬菜中氟虫腈及其代谢物残留的方法.蔬菜样品经乙腈涡旋提取､离心后的提取液经在线净化柱(Cyclone p)净化,以5 mmol·L-1乙酸铵⁃乙腈溶液将目标物洗脱至C18分析柱上,用LC⁃MS / MS检测.本方法在1—50 ng·mL-1浓度范围内有良好的线性关系,检出限分别为氟虫腈0.5 μg·kg-1､氟虫腈硫醚0.1 μg·kg-1､氟虫腈砜0.1 μg·kg-1､氟甲腈0.1 μg·kg-1.该方法前处理简便快速､试剂用量少､回收率高､灵敏度和重现性好,适用于蔬菜中氟虫腈及其代谢物检测.
关键词
在线净化,蔬菜,氟虫腈, LC⁃MS / MS
氟虫腈(Fipronil)是由法国罗纳⁃普朗克公司在1987年开发研制的一种苯基吡唑类广谱杀虫剂.氟虫腈的杀虫谱广,具有触杀､胃毒和一定的内吸作用,可用于防治水稻､蔬菜､棉花等多种作物害虫,因其防虫效果好､用量低､起效时间长等优点曾作为代替高毒有机磷农药的首选品种.随着氟虫腈的广泛使用,其在作物中半衰期长､对环境不友好､残留物在生物体内富集等毒副作用也日益显现.在正常使用下,氟虫腈代谢产物主要有MB45950(氟虫腈硫醚)､MB46136(氟虫腈砜)､MB46513(氟甲腈),都具有一定毒性,有的毒性甚至高于母体.目前氟虫腈及其代谢物的检测方法主要有液相色谱法､气相色谱法和气相色谱-质谱联用法.TurboflowTM是一种针对复杂基质样品在线净化技术,该技术结合了体积排阻和反相保留原理,在捕获目标化合物的同时能够快速净化基质样品.本文利用Turboflow在线净化技术与液相色谱串联质谱技术联用测定氟虫腈及其代谢产物在蔬菜中的残留
1实验部分
1.1试剂与仪器
氟虫腈､氟虫腈砜､氟虫腈硫醚､氟甲腈标准溶液(均为1000 mg·L-1,农业部环境保护科研监测所);乙腈､甲醇､乙酸､乙酸铵(HpLC级);实验用水为milli⁃Q超纯水.TSQ Quantum Ultra三重四极杆质谱仪,Transcend在线样品前处理设备(美国ThermoFisher公司);5804R冷冻离心机(德国Eppendorf公司);电子分析天平(德国Sartorius公司);涡旋混合器(德国IKA公司).
1.2样品前处理
蔬菜样品取可食部分,粉碎均匀后装入干净密封容器中,于-18℃冷冻保存.准确称取解冻样品5.0 g,置于50 mL塑
料离心管中,加入10 mL乙腈,于涡旋混合器上涡旋1 min,6000 r·min-1离心5 min,取1 mL上清液过0.22 μm滤膜,上机
测定.
1.3在线净化条件
在线净化柱:Cyclone⁃p (0.5×50 mm);上样溶剂(A):5 mmol·L-1乙酸铵水溶液;洗脱溶剂( B):甲醇;清洗溶剂( C):异丙醇/乙腈/丙酮(1 / 1 / 1,V/ V/ V),洗脱流速:2.0 mL·min-1,进样体积:50 μL.分析柱:Hypersil GOLD(100×2.0 mm,1.9 μm),流动相A相:5 mmol·L-1乙酸铵水溶液,流动相B相:乙腈.在线净化
程序见表1.
1.4质谱条件
电喷雾离子源(ESI),负离子扫描,电喷雾电压:2500 V,离子源温度:400℃,鞘气压力:40 psi,辅助气压力:15 psi,源内诱导解离电压:10 V,毛细管温度:350℃,Q1,Q3单位分辨率:0.7 Da;选择反应监测(SRM)工作模式,SRM优化参数列表见表2.
2结果与讨论
2.1质谱条件优化
用蠕动注射泵注射1.0 μg·mL-1混标溶液进入质谱(流速5 μL·min-1),调节喷雾电压､鞘气､辅助气等质谱条件,在负离子扫描模式下分别进行一级全扫描,获得各化合物准分子离子峰,以其作为母离子进行二级质谱扫描,选取响应信号较强的两个特征碎片离子,与母离子组成多反应监测离子对,并优化子离子碰撞能量.
2.2在线净化条件的优化
TurboFlowTM技术通过扩散溶解､尺寸排阻､柱层析技术将蛋白等一些大分子物质滤掉,将小分子保留,其在线净化过程主要包括上样､洗脱转移和淋洗条件化.上样是在流动相推动下,样液中的目标化合物被在线净化柱吸附,而大分子杂质流出净化柱而进入废液.本实验选用反相混合聚合物基质的Cyclone⁃p柱,以5 mmol·L-1乙酸铵溶液为上样溶液,使4种目标化合物均能有效保留,且在洗脱转移时能被完全洗脱.洗脱转移是使用洗脱环中的洗脱液将在线净化柱上保留的目标化合物洗脱下来进入分析柱;优化5 mmol·L-1乙酸铵溶液与乙腈不同比例来洗脱分析物,发现5 mmol·L-1乙酸铵溶液+乙腈(20+80,V/ V)既保证化合物洗脱效率,又能达到不错的峰型和分离度.
2.3 UHpLC条件的优化
UHpLC条件主要是洗脱泵的流路组成和配比,在线净化柱流出的目标化合物由在线净化洗脱液和HpLC流动相带入分析柱, TurboFlow洗脱液和UHpLC流动相的初始比例对目标化合物的峰型和分离影响较大,洗脱液为5 mmol·L-1乙酸铵溶液+乙腈(20+80,V/ V),为了减小有机溶剂效应,实验的Step2转移洗脱采用低TurboFlow流速(0.06 mL·min-1 )和高HpLC流速(0.4 mL·min-1),HpLC流动相起始比例为95%A,进一步稀释了进入分析柱的在线净化洗脱液中的乙腈比例.在UHpLC流动相选择上,考察了水溶液､5 mmol·L-1乙酸铵水溶液､10 mmol·L-1乙酸铵溶液为水相( A),乙腈或甲醇为有机相(B),结果表明加5 mmol·L-1乙酸铵水溶液和10 mmol·L-1乙酸铵水溶液的流动相,目标物峰型较好且响应无明显差异,为了简化实验程序,采用5 mmol·L-1乙酸铵水溶液,与TurboFlow上样溶剂一致.
2.4标准曲线线性和方法检出限
为消除基质效应的影响,本实验采用空白基质液加标的混合标准工作液,选用甘蓝､油麦菜空白基质溶液,添加混标溶液配制1—50 ng·mL-1范围的标准工作液,上机测定,以浓度为横坐标,测试物峰面积为纵坐标绘制标准曲线,在1—50 ng·mL-1浓度范围内各组分均呈良好的线性.以目标物在空白样品中3倍信噪比计算检出限:氟虫腈0.5 μg·kg-1､氟虫腈硫醚0.1 μg·kg-1､氟虫腈砜0.1 μg·kg-1､氟甲腈0.1 μg·kg-1.甘蓝空白样品及添加样品中氟虫腈及其代谢物的SRM数据见图1.
2.5添加回收率和精密度
在甘蓝､油麦菜空白基质中分别添加目标物浓度为5.0､10.0､50.0 μg·kg-1,进行3个水平的回收试验,按本方法提取,结果表明目标物的回收率都在84.5%—97.3%,相对标准偏差都<6.7%.回收率及精密度见表3.
2.6实际样品的测定
采用本方法检测市售的甘蓝和油麦菜各10份,结果均未检出氟虫腈及其代谢产物农药残留.
3结论
本文建立了在线净化/液相色谱串联质谱技术测定蔬菜中氟虫腈及其代谢物的方法.本方法采用先进的TurboflowTM在线净化技术,前处理简单,试剂用量减少,可快速全自动处理分析样品,并且可以降低基质干扰的影响.采用乙腈提取目标物,提取液直接在线净化,串联质谱测定,方法检出限为0.1—0.5 μg·kg-1.该方法回收率稳定,重现性良好,适用于蔬菜中氟虫腈及其代谢产物残留量的检测,已经应用于本单位的日常样品检测中.
作者：堵燕钰,罗漪涟,王洁琼,吴冬梅,翟云忠,殷雪琰,徐牛生
作者单位：常州市农畜水产品质量监督检验测试中心,赛默飞世尔科技(中国)有限公司